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玻璃層析柱的使用方法
發(fā)布時(shí)間： 2022-06-18 點(diǎn)擊次數(shù)： 3850次玻璃層析柱適用于分子篩、離子交換、凝膠滲透與親和層析。隨著液相層析法進(jìn)入血液制品生產(chǎn)，利用層析法，可純化血漿中多種蛋白，例如白蛋白等等。下面讓我們一起來了解一下玻璃層析柱的使用方法吧。先用洗液洗凈層析柱，用水清洗后再用蒸餾水清洗、干燥，在層析柱底鋪一層玻璃纖維或脫脂棉，而后將吸附劑氧化鋁裝入柱內(nèi)。裝入的方法分濕法和干法兩種，濕法是將備用的溶劑轉(zhuǎn)入管內(nèi)，將氧化鋁和溶劑調(diào)成漿狀慢慢地倒入管中，此時(shí)應(yīng)將管的下端活塞打開使溶劑慢慢流出，吸附劑即漸漸沉子管底，加完氧化鋁后繼續(xù)使溶液流出，直至氧化鋁的沉降不再變動;干法是在管上端放一漏斗，使氧化鋁均勻地經(jīng)漏斗成一細(xì)流慢慢裝入管內(nèi)，中間不應(yīng)間斷，時(shí)時(shí)輕輕敲打玻璃管使填轉(zhuǎn)均勻，全部加入后再加入溶劑使氧化鋁全部潤濕。一般以濕法裝柱為宜，因?yàn)槿菀装褗A雜在氧化鉛中的氣泡趕出，無論采用那一種方法裝柱，必須注意以下事項(xiàng)。?、俨荒苁寡趸X中有裂縫和氣泡，否則影響分離效果。?、谘趸X的高度一般為玻璃管高度的3/4。?、垩b好的氧化鋁柱上面覆蓋一層濾紙、玻璃纖維或脫脂棉以保持氧化鋁上端頂部平整，不受流入溶劑的干擾。?、苎趸X柱上面要保持約0. 5 ~ lcm高的溶劑層，勿使氧化鋁露出溶劑的液面，上面裝一分液漏斗。待柱裝妥后，然后加樣，把將要分離的樣品溶在一定體積的溶劑中配成樣品溶液，將氧化鋁上的多余溶劑排出，直到柱內(nèi)液面到達(dá)氧化鋁的表面時(shí)，停止排放。沿管壁加入樣品溶液，注意不讓溶劑把氧化鋁沖松浮起，樣品溶液加畢后，開放活塞使液體漸漸放出至溶劑液面和氧化鋁表面齊平(勿使氧化鋁表面干燥)。樣品吸附在氧化鋁柱上后，用合適的溶劑進(jìn)行洗脫，樣品中各組分在氧化鋁上經(jīng)過吸附、溶解、再吸附、再溶解······,規(guī)律地自上而下移動，使樣品分成若干色圈(或稱色環(huán))，達(dá)到分離、提純目的。必須注意層析柱的直徑愈粗形成的色圈愈狹小，色帶相互之間排列愈緊，對分辨和分離難度要大一些，但分離時(shí)間較短，速度較快，柱細(xì)長對色帶相互之間距離增大容易分開，但分離時(shí)間長，對裝填吸附劑操作不方便，通常選擇柱的直徑與長度的比例在1：30或1：25及1：20的范圍比較合適。
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